Roche VENTANA PD-L1 (SP263) Assay, Lung 1% cutoff, CE IVD, Predictive, NSCLC Manuel utilisateur

Test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour
le cancer du poumon non à petites cellules
Guide d’interprétation
2 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules
Table des matières
Introduction
5
Utilisation prévue
Notice d’utilisation du produit
Objectif du Guide d’interprétation
6
6
6
Évaluation
Évaluation des profils et de l’intensité de coloration des cellules tumorales
Profils de coloration des cellules immunitaires
7
7
10
Exigences concernant les tissus
Critères d’acceptabilité de la morphologie et de la coloration de fond
14
14
Tissu de contrôle positif
15
Critères de notation
Tableau de notation PD-L1
16
16
Évaluation de la coloration membranaire en pourcentage
17
Atlas d’expression de la PD-L1 dans le NSCLC
Galerie de photos
18
18
Cas difficiles
32
Influence des conditions préanalytiques sur la coloration par le test
VENTANA PD-L1 (SP263) Assay
Recommandations de fixation pour obtenir des résultats de coloration optimaux avec le test
VENTANA PD-L1 (SP263) Assay
Influence de l’épaisseur des tissus sur la coloration par le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay
Stabilité des lames
Références
Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 40
40
41
41
42
3
4 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules
Introduction
Le cancer du poumon, ou cancer bronchique, est le cancer le plus
fréquent dans le monde depuis plusieurs décennies et demeure la
cause majeure de mortalité liée au cancer dans le monde. On estime
qu’il représente 12,9 % de tous les nouveaux cas de cancer et qu’il est
responsable de près de 1,59 million de décès chaque année dans le
monde, soit environ un décès sur cinq liés au cancer1. Bien que des
progrès aient été faits en matière de diagnostic et de traitement, le
pronostic demeure mauvais avec de faibles taux de survie à long terme,
quel que soit le stade. Au cours des trois dernières décennies, le cancer
du poumon a connu l’une des plus faibles améliorations du taux de
survie parmi l’ensemble des cancers2.
Le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay utilise un rabbit monoclonal
primary antibody (anticorps primaire monoclonal de lapin) dirigé
contre le programmed death-ligand 1 (ligand 1 de mort cellulaire
programmée) PD-L1, l’homologue 1 du B7 (CD274). Il reconnaît une
glycoprotéine transmembranaire d’un poids moléculaire de 45 à
55 kDa.
L’anticorps VENTANA PD-L1 (SP263) a été développé par Spring
BioScience. Ce produit est un anticorps prédilué destiné à être utilisé
sur des instruments BenchMark IHC/ISH avec le kit de détection
OptiView DAB IHC, et utilise le Guide d’interprétation du test VENTANA
PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules.
Le cancer du poumon non à petites cellules (NSCLC), l’un des deux
principaux types de cancer du poumon, représente près de 85 % de
tous les cas de cancer du poumon3. Chez près de la moitié des patients
dont le NSCLC a été nouvellement diagnostiqué, la maladie a déjà
métastasé, réduisant ainsi nettement la probabilité de survie. Le taux de
survie relatif à 5 ans chez les patients diagnostiqués comme présentant
un NSCLC avec présence de métastases est de 4,7 %3. La majorité des
patients atteints de NSCLC présentent une maladie inopérable de stade
localement avancé (stade IIIB) ou une maladie métastatique (stade IV),
pour laquelle il n’existe actuellement aucun traitement curatif.
En moyenne, ces patients meurent dans l’année qui suit le diagnostic.
L’amélioration des résultats cliniques du cancer du poumon pourra
certainement être possible grâce à une meilleure compréhension des
événements moléculaires à la base de sa pathogenèse, en identifiant
de nouveaux biomarqueurs cibles et en développant de nouvelles
options de traitement.
La PD-L1 est une protéine transmembranaire qui diminue les
réponses immunitaires en se liant à deux de ses récepteurs inhibiteurs,
programmed death-1 (PD-1) et B7-1 (CD80)4. PD-1 est un récepteur
inhibiteur exprimé sur les lymphocytes T suite à l’activation de ces
derniers, cette activation perdurant en état de stimulation chronique
comme dans les cas d’infection chronique ou de cancer5. La liaison
de PD-L1 et de PD-1 empêche la prolifération des lymphocytes T,
la production des cytokines et l’activité cytolytique, ce qui entraîne
l’inactivation fonctionnelle ou l’épuisement des lymphocytes T.
CD80 est une molécule exprimée sur les cellules présentatrices
d’antigène et sur les lymphocytes T activés. La liaison de la protéine
PD-L1 et du récepteur CD80 sur les lymphocytes T et les cellules
présentatrices d’antigène peut entraîner une diminution des réponses
immunitaires, y compris l’inhibition de l’activation des lymphocytes T
et la production des cytokines6. L’expression de PD-L1 sur les cellules
immunitaires et tumorales a été observée7,8. L’expression aberrante
de PD-L1 sur les cellules tumorales semblerait entraver l’immunité
antitumorale, résultant en une évasion immunitaire5,8. L’interruption de
la voie PD-L1/PD-1 représente donc une stratégie intéressante pour
redynamiser l’immunité des lymphocytes T spécifiques de la tumeur
supprimée par l’expression de PD-L1 dans le microenvironnement
tumoral. La PD-L1 est exprimée dans un grand nombre de cancers,
dont le cancer des poumons, le mélanome, le cancer urothélial, le
cancer de l’ovaire et le cancer colorectal. La prévalence de l’expression
de la PD-L1 est comprise entre 12 et 100 % en fonction du type de
tumeur, du clone anti PD-L1 et du seuil de positivité9.
Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 5
Utilisation prévue
Notice d’utilisation du produit
Consulter la notice du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay
correspondant pour une description détaillée de l’utilisation prévue
pour ce produit.
Remarque : L’utilisation de ce diagnostic avec les traitements indiqués
peut ne pas être autorisée dans tous les pays. Consulter votre
représentant local Roche pour obtenir les approbations locales.
Objectif du Guide d’interprétation
Le présent guide a pour objectif de fournir aux pathologistes un outil
facilitant l’évaluation clinique de coupes de tissu de NSCLC fixées au
formol et incluses en paraffine colorées avec le test VENTANA PD-L1
(SP263) Assay en utilisant l’algorithme de notation VENTANA PD-L1
(SP263), conformément à la notice du produit. Plus précisément,
ce guide :
•
Contient des clichés photographiques qui illustrent les profils et
l’intensité de coloration pouvant résulter de la coloration des tissus
de NSCLC avec le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay.
•
Donne des exemples de cas difficiles à déterminer.
•
Présente d’autres contrôles susceptibles d’être utilisés avec le test
mais qui ne sont pas fournis par Ventana.
6 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules
Évaluation
Évaluation des profils et de l’intensité de coloration des cellules tumorales
Les cellules néoplasiques de NSCLC marquées avec le test VENTANA
PD-L1 (SP263) Assay sont évaluées afin de déterminer le pourcentage
de positivité des cellules tumorales avec coloration membranaire,
quelle que soit l’intensité du signal DAB (diaminobenzidine).
La coloration immunohistochimique des tissus de NSCLC est
membranaire et/ou cytoplasmique, et peut être exprimée de manière
homogène ou hétérogène dans tout le néoplasme. La coloration
membranaire peut être discontinue, périphérique ou basolatérale.
La coloration cytoplasmique est généralement diffuse bien que
certains cas soient finement granulaires. De rares cas ont présenté
une coloration punctiforme périnucléaire d’intensité variable.
Le pourcentage total d’intensités de signal provenant de la membrane
tumorale est estimé visuellement et utilisé pour déterminer le
niveau d’expression de la PD-L1. La coloration cytoplasmique des
cellules tumorales n’est pas prise en compte pour la détermination
de l’expression de la PD-L1. Un anticorps de contrôle négatif
correspondant à l’isotype est utilisé pour évaluer la présence d’une
coloration de fond dans les échantillons testés et établir une intensité
de coloration de référence.
NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Divers profils de coloration membranaire et cytoplasmique dans les cellules tumorales (20X)
Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 7
NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Cellules tumorales avec coloration membranaire de type basolatéral (20X)
NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Cas inhabituel de coloration punctiforme périnucléaire au sein des cellules tumorales (40X)
8 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules
NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Dans les cas présentant un profil globalement basolatéral de coloration membranaire des
cellules tumorales, seules les cellules avec une expression cellulaire tumorale certaine (la flèche rouge indique les cellules tumorales avec
coloration membranaire latérale) doivent être incluses dans l’estimation du pourcentage. Les zones où la coloration peut être attribuée à des
cellules immunitaires, à des éléments du stroma ou à la membrane basale, et non avec certitude à une coloration tumorale ne doivent pas être
prises en compte (la flèche bleue désigne la coloration sous les cellules tumorales sans coloration latérale) (20X)
Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 9
Profils de coloration des cellules immunitaires
Les cellules immunitaires présentent toute une gamme d’intensités
de coloration : négative, cytoplasmique diffuse faible ou signal
membranaire faible à fort. Une coloration punctiforme peut être
observée en association avec des lymphocytes. L’expression de la
PD-L1 a été constatée dans des lymphocytes, des macrophages,
des histiocytes, des cellules plasmatiques et des neutrophiles.
Des images représentatives des cellules immunitaires colorées avec
le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay sont fournies ci-dessous
pour référence afin d’aider le pathologiste à différencier la coloration
des cellules tumorales de celle des cellules immunitaires. Lors de la
détermination du niveau d’expression de la PD-L1, la coloration des
cellules immunitaires n’est pas prise en compte. REMARQUE : Les
cellules immunitaires ne constituent pas un contrôle interne positif
fiable.
NSCLC, H&E : Cellules tumorales avec macrophages alvéolaires
(flèche) (20X)
NSCLC, VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Coloration positive des
macrophages alvéolaires (flèche) avec tumeur négative à la PD-L1
adjacente, zéro pourcent de coloration (20X)
NSCLC, H&E : Cellules tumorales avec cellules immunitaires
lymphocytaires et plasmatiques (20X)
NSCLC, VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Coloration punctiforme
des cellules immunitaires (flèche bleue) et diffuse (flèche noire) avec
tumeur négative à la PD-L1 adjacente, zéro pourcent de coloration
(20X)
10 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules
NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Avec un grossissement de 4X (images du haut), il semble que le profil de coloration soit une
coloration de la membrane tumorale significative. L’examen avec un grossissement supérieur (20X, en bas) révèle que la tumeur est globalement
négative à la PD-L1, avec une coloration des cellules immunitaires membranaire (flèche noire) et punctiforme (flèche bleue). Une coloration des
cellules dendritiques est également observée (flèche rouge).
Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 11
NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Cellules plasmatiques avec coloration cytoplasmique faible diffuse à modérée. Les cellules
tumorales adjacentes ne présentent pas de coloration (20X)
12 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules
NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Les neutrophiles colorés à l’aide de H&E expriment la PD-L1 (flèche bleue). Le cas présente
également une coloration membranaire des cellules tumorales modérée (flèche noire) (40X)
Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 13
Exigences concernant les tissus
Le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay nécessite une coupe de
tissu en série pour la coloration H&E (hématoxyline et éosine), une
deuxième coupe de tissu en série pour la coloration avec l’anticorps
de contrôle négatif et une troisième coupe de tissu en série pour
la coloration avec le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. En outre,
le tissu placentaire humain sain à terme peut être utilisé comme
contrôle pour le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. Ce tissu présente
une coloration uniforme modérée à forte de la membrane et une
coloration uniforme faible à forte du cytoplasme dans les cellules
de la lignée trophoblastique. Les vaisseaux et le tissu du stroma
placentaire peuvent être utilisés pour évaluer toute coloration de fond.
Si l’évaluation H&E indique que l’échantillon patient n’est pas adéquat,
un nouvel échantillon doit être prélevé. La coloration d’un échantillon
doit être répétée sur des lames non colorées si (1) la lame de contrôle
du tissu ne présente pas de coloration acceptable ; (2) la lame de
contrôle négatif ne présente pas de coloration acceptable ; ou (3) la
lame à tester (la lame d’IHC PD-L1) colorée à l’aide du test VENTANA
PD-L1 (SP263) Assay ne peut pas être évaluée. Si la dernière de ces
lames ne peut pas être interprétée en raison d’artéfacts, d’artéfacts
de bordure, d’une nécrose, d’un manque de tissu, ou pour toute autre
raison, alors la lame ne peut être utilisée pour l’évaluation clinique.
Si les contrôles sont acceptables et si la lame colorée à l’aide du test
VENTANA PD-L1 (SP263) Assay peut être évaluée, la lame peut être
évaluée par un pathologiste qualifié comme indiqué dans les Critères
de notation.
Critères d’acceptabilité de la morphologie et de la coloration de fond
L’acceptabilité de la morphologie et de la coloration de fond des tissus peut être évaluée pour chaque cas de patient en utilisant les critères décrits
dans les Tableaux 2 et 3.
Tableau 2 : Critères d’acceptabilité de la morphologie
Interprétation
Observation au microscope
Acceptable
Les éléments cellulaires d’intérêt sont visualisés, ce qui permet une interprétation de la coloration.
Inacceptable
Les éléments cellulaires d’intérêt ne sont pas visualisés, ce qui compromet l’interprétation de la coloration.
Tableau 3 : Critères d’acceptabilité de la coloration de fond
Interprétation
Description de la coloration
Acceptable
Coloration non spécifique non intrusive à l’interprétation de la coloration spécifique.
Inacceptable
Coloration non spécifique intrusive à l’interprétation de la coloration spécifique.
14 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules
Tissu de contrôle positif
Un tissu de contrôle positif connu, fixé et traité de la même manière
que les échantillons de patients, doit être testé pour chaque ensemble
de conditions de test et lors de chaque procédure de coloration
réalisée avec le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. Le tissu de
contrôle (un cas indice) doit être un prélèvement récent d’autopsie,
de biopsie ou de chirurgie, préparé et fixé dès que possible d’une
manière identique aux tissus de patients. Ces tissus peuvent être
utilisés pour contrôler toutes les étapes de traitement et de coloration
des échantillons. Une coupe de tissu fixée ou traitée différemment de
l’échantillon testé peut être utilisée comme contrôle pour les réactifs et
la coloration, mais non pour la fixation ou préparation des tissus. Un cas
de NSCLC positif avec coloration modérée est plus adapté au contrôle
qualité qu’un cas qui présente une coloration forte, car il pourra être
Placenta, VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Coloration
membranaire uniforme forte et coloration cytoplasmique
modérée des cellules de la lignée trophoblastique (10X)
utilisé pour détecter des niveaux mineurs de dégradation des réactifs
ou des problèmes hors spécifications pouvant être liés à l’instrument.
La coloration positive de la membrane des cellules néoplasiques dans
le tissu de contrôle sert à confirmer que l’anticorps VENTANA PD-L1
(SP263) a été appliqué et que l’instrument fonctionne correctement.
Le tissu de contrôle positif ne doit être utilisé que pour contrôler les
performances et non pour aider à établir un diagnostic clinique des
échantillons de patients. De plus, le test VENTANA PD-L1 (SP263)
Assay peut utiliser le placenta humain à terme comme contrôle positif,
qui présente une coloration uniforme modérée à forte de la membrane
et une coloration uniforme faible à forte du cytoplasme dans les
cellules de la lignée trophoblastique. Les vaisseaux et le tissu du stroma
placentaire peuvent être utilisés pour évaluer toute coloration de fond.
Placenta, VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Stroma et vaisseaux
des villosités ne présentant aucune coloration PD-L1 (20X)
Tableau 4 : Critères d’évaluation du tissu placentaire de contrôle pour le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay
Interprétation
Description de la coloration
Acceptable
Coloration uniforme modérée à forte de la membrane des cellules de la lignée trophoblastique,
et
coloration du stroma placentaire et des vaisseaux.
Inacceptable
Coloration uniforme inexistante à faible de la membrane des cellules de la lignée trophoblastique
et/ou
coloration spécifique dans le tissu du stroma placentaire et le tissu vasculaire.
Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 15
Critères de notation
Un pathologiste qualifié attribue le score d’IHC pour la PD-L1 en
fonction de son évaluation de la fréquence de la coloration IHC
membranaire PD-L1 spécifique dans les cellules tumorales. Un niveau
d’expression est attribué aux cas comme décrit dans le Tableau de
notation PD-L1.
Les cas ne pouvant être évalués incluent notamment les cas présentant
une quantité de tumeur viable insuffisante, une coloration de fond
ou une décalcification. Les cas de NSCLC présentant une quantité
suffisante de cellules tumorales viables (comme déterminée par le
pathologiste chargé de la notation) et sans coloration de fond sur la
lame IHC PD-L1 sont acceptables pour l’évaluation.
Des images des divers profils de coloration et d’expression sont
fournies dans les pages qui suivent.
Tableau de notation PD-L1
Tableau 5 : Notation PD-L1
Évaluer et dénombrer le pourcentage de cellules tumorales dont la membrane est positive à PD-L1, quelle que soit l’intensité au-delà de la coloration de fond, tel que
noté sur le contrôle isotype négatif correspondant. Le niveau d’expression de la PD-L1 est indiqué sous forme de nombre entier.
16 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules
Évaluation de la coloration membranaire en pourcentage
La galerie d’images qui suit montre un spectre quantitatif de coloration
membranaire des cellules tumorales sur un éventail d’échantillons
de NSCLC contenant des cellules tumorales viables, à des fins
d’illustration uniquement. Les niveaux d’expression de 0 % à 100 % des
cellules tumorales avec coloration membranaire ont été représentés
à titre d’exemple afin d’aider le pathologiste à évaluer la coloration
PD-L1. La détermination de la quantité suffisante d’échantillon est
laissée à la discrétion du pathologiste.
0%
<1 %
1%
3%
5%
8%
10 %
20 %
25 %
35 %
50 %
100 %
Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 17
Atlas d’expression de la PD-L1 dans le NSCLC
Galerie de photos
La coloration se caractérise par la présence de tout signal détectable
au-delà de la coloration de fond, tel que noté sur le contrôle isotype
négatif correspondant par la coloration membranaire des cellules
néoplasiques. Cet atlas d’expression contient des exemples des
niveaux d’expression dans divers champs visuels. La légère coloration
membranaire des cellules tumorales n’est pas facile à discerner à faible
grossissement et peut nécessiter un examen patient et méthodique de
la lame colorée à un grossissement plus élevé, notamment dans les cas
où elle s’accompagne d’une coloration cytoplasmique faible.
Jeu de photos 1. Coloration négative des cellules tumorales et immunitaires
(zéro pourcent) (20X)
Pour les cas présentant une expression de la PD-L1 située en bas
du spectre, toute coloration membranaire des histiocytes ou des
macrophages alvéolaires doit être identifiée afin de ne pas l’interpréter
par erreur comme une coloration des cellules tumorales. Se référer
à la lame H&E peut aider à différencier les cellules tumorales des
cellules immunitaires. La différence entre l’expression de la PD-L1
inférieure à 1 % et de 1 % étant très mince, la numération des cellules
18 (soit en comptant le nombre total de cellules tumorales présentant une
coloration membranaire et en le comparant au nombre total de cellules
tumorales viables, soit en comptant les groupes de cellules tumorales
dont la membrane est colorée et en le ramenant à l’intégralité de
la tumeur viable) peut aider le pathologiste à mieux distinguer ces
niveaux d’expression si proches.
Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules
Jeu de photos 2. Moins de 1 % de cellules tumorales avec coloration membranaire (cercles bleus). Cellules immunitaires éparses présentant une
coloration membranaire, cytoplasmique et punctiforme (flèches noires) (10X)
Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 19
Jeu de photos 3. Tumeur comportant 1 % de cellules tumorales avec coloration membranaire (cercles bleus). Macrophages alvéolaires épars
avec coloration membranaire faible présents dans les lumières (flèches noires) (10X)
20 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules
Jeu de photos 4. Tumeur comportant 3 % de cellules tumorales avec coloration membranaire (cercles bleus). Cellules immunitaires éparses
présentant une coloration principalement punctiforme (flèches et cercles noirs) (10X)
Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 21
Jeu de photos 5. Tumeur comportant 5 % de cellules avec coloration membranaire entourées en bleu. La zone tumorale (comportant la tumeur
viable, une desmoplasie adjacente et une inflammation) contient des zones focales avec des cellules immunitaires montrant l’expression de la
PD-L1 (4X)
22 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules
Jeu de photos 6. Tumeur comportant 10 % de cellules avec coloration membranaire légère à modérée (entourées en bleu) dans ce champ visuel.
Cellules immunitaires éparses présentant également une expression de la PD-L1 (entourées en noir) (10X)
Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 23
Jeu de photos 7. Tumeur comportant 15 % de cellules avec coloration membranaire (entourées en bleu). Une coloration des cellules
immunitaires associées à la tumeur est également observée (2X)
24 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules
Jeu de photos 8. Tumeur comportant 20 % de cellules avec coloration membranaire légère (entourées en bleu) dans ce champ visuel. La zone
tumorale contient quelques cellules immunitaires avec expression de la PD-L1 (entourées en noir) (10X)
Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 25
Jeu de photos 9. Tumeur comportant 25 % de cellules avec coloration membranaire (entourées en bleu) dans ce champ visuel. La zone tumorale
contient quelques cellules immunitaires avec expression de la PD-L1 (entourées en noir). Les zones de nécrose peuvent présenter une coloration
et ne doivent pas être prises en compte (entourées en vert) (4X)
26 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules
Jeu de photos 10. Tumeur comportant 35 % de cellules avec coloration membranaire (entourées en bleu) dans ce champ visuel. La zone
tumorale contient quelques cellules immunitaires avec expression de la PD-L1 (entourées en noir) (4X)
Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 27
Jeu de photos 11. Tumeur comportant 50 % de cellules avec coloration membranaire (entourées en bleu) dans ce champ visuel. La zone
tumorale (comportant la tumeur viable, une desmoplasie adjacente et une inflammation) contient quelques cellules immunitaires avec expression
de la PD-L1 (entourées en noir). Les zones de nécrose colorées sont entourées en vert et ne doivent pas être prises en compte (4X)
28 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules
Les cas présentant plus de 50 % de cellules tumorales avec coloration
membranaire peuvent être estimés de manière plus précise et plus
reproductible en évaluant le pourcentage de cellules tumorales sans
coloration membranaire puis en le soustrayant à 100 % afin d’obtenir le
niveau d’expression de PD-L1 final.
Jeu de photos 12. Tumeur comportant 70 % de cellules avec coloration membranaire (entourées en bleu) dans ce champ visuel. La zone
tumorale contient des cellules immunitaires avec expression de la PD-L1 (entourées en noir). La coloration des zones de nécrose ne doit pas être
prise en compte (entourées en vert) (4X)
Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 29
Jeu de photos 13. Tumeur comportant 80 % de cellules avec coloration membranaire dans ce champ visuel. Une estimation des cellules
tumorales sans coloration membranaire (entourées en rouge) suivie d’une soustraction à 100 % pour obtenir le pourcentage final de cellules
tumorales avec coloration membranaire peut donner des résultats plus précis et reproductibles (10X)
30 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules
Jeu de photos 14. Coloration de la membrane des cellules tumorales à 100 % (4X)
Jeu de photos 15. Coloration de la membrane des cellules tumorales positive (100 %) sans coloration de cellules immunitaires associées à la
tumeur (20X)
Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 31
Cas difficiles
•
Divers profils de coloration et caractéristiques morphologiques
peuvent rendre difficiles l’interprétation et la quantification de la
coloration membranaire de la tumeur.
Certains cas peuvent être particulièrement compliqués en raison des
facteurs suivants :
•
Coloration cytoplasmique faible
Certains échantillons peuvent présenter une faible coloration
cytoplasmique des cellules tumorales qui peut être confondue,
à faible grossissement, avec une faible coloration membranaire
des cellules tumorales. Pour cette raison, lors de l’évaluation
des lames colorées à l’aide du test VENTANA PD-L1 (SP263)
Assay, une coloration faible doit être confirmée par l’examen
à un grossissement supérieur afin de distinguer la coloration
membranaire de la coloration cytoplasmique dans les cellules
tumorales.
•
Hétérogénéité
Lorsqu’une répartition hétérogène de l’expression est observée,
l’estimation du pourcentage total de coloration membranaire
des cellules tumorales peut s’avérer difficile. Une approche
systématique peut être utile : la tumeur est divisée en quantités
plus faibles mais égales de tumeur viable qui sont ensuite
évaluées pour déterminer le pourcentage de cellules tumorales
avec membrane, puis la moyenne est calculée.
Quelques exemples de cas difficiles sont illustrés dans les pages
suivantes.
Chevauchement d’une forte coloration des cellules
immunitaires et de la coloration des cellules
tumorales
Certaines tumeurs peuvent contenir un élément hautement
inflammatoire à la fois autour de la tumeur et infiltrant celle-ci.
Dans certains cas, lorsqu’une coloration forte est observée à la
fois pour les cellules tumorales et les cellules immunitaires, il
peut s’avérer difficile de différencier et de quantifier le niveau
d’expression de la PD-L1 pour les cellules tumorales. La présence
de cellules immunitaires infiltrant la tumeur doit être confirmée
à l’aide d’une lame H&E. Le profil de coloration de la PD-L1 ainsi
que les caractéristiques nucléaires des cellules sont utilisés
pour attribuer l’expression aux cellules immunitaires (coloration
punctiforme) et aux cellules tumorales (coloration membranaire
linéaire).
•
Matériel endogène et exogène
Il arrive que du matériel endogène et/ou exogène soit
présent dans les échantillons de NSCLC, comme du pigment
anthracosique, de la mélanine ou de l’hémosidérine, et qu’il
obscurcisse et gêne l’interprétation de la coloration par le test
VENTANA PD-L1 (SP263) Assay des cellules tumorales et
immunitaires. La comparaison de la lame de contrôle isotype
négatif avec la lame colorée de PD-L1 peut permettre de
différencier la coloration des biomarqueurs du matériel endogène
ou exogène. Dans les tumeurs de NSCLC présentant une
formation de kératine significative, une réponse histiocytaire sous
la forme de cellules géantes de corps étranger peut être observée.
Une telle réponse immunitaire peut avoir l’apparence d’une
coloration de cellules tumorales avec une coloration membranaire
des cellules géantes.
32 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules
Cas difficile 1. Le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay a coloré le cas de NSCLC, avec une coloration cytoplasmique faible (flèche noire) et une
coloration membranaire faible (flèche verte) de la cellule tumorale. L’examen à un grossissement supérieur est nécessaire pour différencier la
coloration cytoplasmique faible de la coloration membranaire faible. Une coloration des macrophages alvéolaires est également observée (flèche
rouge). Dans ce champ visuel, 10 % des cellules tumorales présentent une coloration membranaire (20X)
Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 33
Cas difficile 2. Le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay a coloré le cas de NSCLC avec une coloration membranaire faible de la tumeur
(flèche noire). De nombreuses cellules tumorales s’accompagnent d’un blush cytoplasmique. Dans ce champ visuel, 90 % des cellules
tumorales présentent une coloration membranaire (20X)
34 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules
Cas difficile 3. La tumeur montre des cellules présentant à la fois une coloration cytoplasmique faible et une coloration membranaire faible
(flèche noire) et seulement une coloration membranaire faible (flèche bleue). Dans ce champ visuel, 90 % des cellules tumorales présentent une
coloration membranaire (20X)
Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 35
Cas difficile 4. Le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay a coloré le cas de NSCLC présentant une inflammation incluse significative. La coloration
membranaire des cellules immunitaires (flèche noire) et la coloration punctiforme des cellules immunitaires (flèche bleue) sont enchevêtrées avec
les cellules tumorales présentant une coloration membranaire linéaire partielle (flèche rouge). Dans ce champ visuel, 40 % des cellules tumorales
présentent une coloration membranaire. La tumeur très enflammée est observée sur la lame H&E (40X)
36 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules
Cas difficile 5. Coloration membranaire des cellules tumorales (flèche noire) entremêlée avec une coloration des cellules immunitaires diffuse
(flèche bleue) et punctiforme (flèche rouge). Dans ce champ visuel, 100 % des cellules tumorales présentent une coloration membranaire (20X)
Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 37
Cas difficile 6. Le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay a coloré le cas de NSCLC présentant une anthracose (flèche noire) et une réaction à
cellules géantes de corps étranger (flèche rouge) non associée à l’interprétation du cas (en haut, 20X). Une zone différente du cas contient du
pigment anthracosique (flèche noire) chevauchant une coloration punctiforme de cellules immunitaires (flèche verte) ainsi qu’une coloration
membranaire des cellules tumorales (en bas, flèche bleue). Dans ce champ visuel, 80 % des cellules tumorales présentent une coloration
membranaire (en bas, 20X)
38 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules
50 %
90 %
35 %
25 %
Les cellules tumorales avec coloration membranaire sont réparties de manière hétérogène dans l’intégralité de l’échantillon (entourées en bleu).
La division d’une tumeur entière en coupes plus petites comportant des quantités égales de tumeur viable permet d’effectuer une estimation plus
précise. Le pourcentage de cellules tumorales avec coloration membranaire dans chaque coupe est estimé et la moyenne des coupes est calculée
pour déterminer le niveau d’expression global de la PD-L1. La coloration des zones de nécrose ne doit pas être prise en compte. Dans cet exemple,
la moyenne des pourcentages de cellules tumorales viables avec expression membranaire provenant de chaque quadrant donne un niveau
d’expression global de la PD-L1 de 50 % (0,6X)
Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 39
Influence des conditions préanalytiques sur la coloration par le test VENTANA PD-L1 (SP263)
Assay
Recommandations de fixation pour obtenir des résultats de coloration optimaux avec le test VENTANA PD-L1
(SP263) Assay
Ventana recommande d’effectuer la fixation pendant 6 à 72 heures dans du NBF à 10 %. Les fixateurs acceptables et les temps de fixation sont
encadrés en bleu.
Coloration du tissu placentaire par le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay selon les fixateurs et les temps de fixation
Fixateur
Heure
temporelle
(heures)
NBF à 10 %
Formol zinc
Fixateur PREFER**
AFA**
Formol alcool**
Éthanol à 95 %**
1*
6
12
24
48
72
REMARQUES
*Un temps de fixation d’une heure est recommandé pour tous les
types de fixateurs.
**L’utilisation du fixateur PREFER et d’éthanol à 95 % (coloration plus
faible) ou de fixateurs à base d’alcool (coloration de fond élevée)
n’est pas recommandée. Voir les images supplémentaires à un
grossissement supérieur sur la droite.
40 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules
Influence de l’épaisseur des tissus sur la coloration par
le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay
Ventana recommande une épaisseur de tissu de 4 à 5 μm avec le test
VENTANA PD-L1 (SP263) Assay.
Stabilité des lames
Des coupes d’environ 4 à 5 μm d’épaisseur doivent être prélevées et
montées sur des lames chargées positivement. Les lames doivent être
colorées dès que possible après la coupe ; toutefois, des études sur la
stabilité des lames conservées entre 2 et 8 °C et à 30 °C ont démontré
que la coloration est adéquate dans les 12 mois suivant la préparation.
41 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules
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2019-03-26
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