Thermo Fisher Scientific PrioCHECK Porcine PRV gB Ab Serum Strip Kit Mode d'emploi
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Thermo Fisher Scientific PrioCHECK Porcine PRV gB Ab Serum Strip Kit est un test ELISA conçu pour la détection in vitro des anticorps spécifiques de la glycoprotéine B (gB) du virus de la maladie d'Aujeszky dans le sérum de porcs. Ce kit est idéal pour surveiller le statut indemne de la MA des troupeaux de porcs, détecter les anticorps anti-MA après vaccination, et diagnostiquer l'infection à l'échelle individuelle ou à l'échelle du troupeau.
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NOTICE D’UTILISATION PrioCHECK™ Porcine PRV gB Ab Serum Strip Kit Test ELISA pour la détection in vitro des anticorps spécifiques de la glycoprotéine B (gB) du virus de la maladie d'Aujeszky dans le sérum de porcs Référence Catalogue 7589100 Pub. Nº MAN0013951 Rév. A.0 AVERTISSEMENT ! Lire les fiches de données de sécurité (FDS) et suivre les consignes de manipulation. Porter des lunettes de sécurité, des gants et des vêtements appropriés. Les fiches de données de sécurité (FDS) sont disponibles à l’adresse thermofisher.com/support. AVERTISSEMENT ! RISQUES BIOLOGIQUES POTENTIELS. Lire les informations de sécurité relatives aux risques biologiques du produit disponibles sur thermofisher.com. Porter des lunettes de sécurité, des gants et des vêtements appropriés. Introduction Le virus de la maladie d'Aujeszky (MA) ou pseudorage, est un herpèsvirus responsable d'une infection virale largement répandue dans le monde, qui touche principalement le porc, entraînant des pertes économiques importantes au niveau de l'industrie porcine. Les manifestations cliniques sont variées : atteintes du système nerveux, du système respiratoire, troubles de la reproduction, mort de l'animal. Applied Biosystems™ PrioCHECK™ Porcine PRV gB Ab Serum Strip Kit détecte dans le sérum des porcs infectés, les anticorps dirigés contre la glycoprotéine B (gB) du virus de la MA. La glycoprotéine B (dont l'ancienne nomenclature est gII) est l'un des composants majeurs de l'enveloppe virale qui est indispensable au processus d'infection et à l'induction de la synthèse d'anticorps neutralisants. Le test est d'une très grande utilité pour détecter les porcs infectés naturellement par différentes souches virales ainsi que les porcs (illégalement) vaccinés avec des vaccins conventionnels ou avec des vaccins marqueurs. PrioCHECK™ Porcine PRV gB Ab Serum Strip Kit qui détecte les anticorps spécifiques du virus de la maladie d'Aujeszky (MA) dans le sérum des porcs peut être utilisé pour : • Surveiller le statut d'indemne de MA des troupeaux de porcs. • Détecter les anticorps anti-MA après vaccination (illégale) avec un vaccin conventionnel ou un vaccin marqueur. • Surveiller le taux d'anticorps anti-MA chez les porcs après vaccination. • Diagnostiquer l'infection à l'échelle individuelle ou à l'échelle du troupeau. Principe du test PrioCHECK™ Porcine PRV gB Ab Serum Strip Kit est un ELISA bloquant qui détecte les anticorps dirigés contre le virus de la maladie d'Aujeszky (MA). La liaison entre un épitope situé sur la glycoprotéine B (gB) du virus de la MA et un anticorps monoclonal spécifique est bloquée par les anticorps spécifiques présents dans l'échantillon. Un antigène non infectieux du virus de la MA est coaté dans une microplaque. Le sérum de porc non dilué est ajouté dans les puits. La plaque est incubée 1 heure à 37±1°C ou à T° ambiante (22±3°C). Le conjugué, qui est un anticorps monoclonal marqué à la peroxydase, est ensuite distribué dans tous les puits et la plaque est incubée à nouveau 1 heure à 37±1°C ou à 22±3°C. Après lavage des puits, le substrat chromogène (TMB) est ajouté et incubé 20 minutes. Le développement de la coloration est stoppé et la densité optique (DO) est mesurée à 450 nm. Composition du coffret Coffret de 5 plaques pour 450 échantillons. Le coffret PrioCHECK™ Porcine PRV gB Ab Serum Strip Kit, s’il peut être stocké à 5±3°C jusqu’à la date de péremption qui figure sur l'étiquette du coffret. La durée de conservation des produits du coffret, une fois dilués, ouverts ou reconstitués, est mentionnée au chapitre s'y référant (voir ci-dessous). Composant Description 1 : Microplaque Cinq microplaques conditionnées sous vide partiel dans des sachets contenant un déshydratant. 2 : Conjugué (30x) Concentré 30x, à diluer avant utilisation. Un flacon contenant 2.5 mL de conjugué. Le conjugué dilué n’est pas stable, à préparer juste avant utilisation. 3 : Tampon de dilution Prêt à l'emploi. Un flacon contenant 60 mL de tampon de dilution. 4 : Liquide de lavage (200x) Concentrée 200x, à diluer avant utilisation. Un flacon contenant 60 mL de solution de lavage. Conservation de la solution : 1 semaine à 22±3°C. 5 : Eau déminéralisée Un flacon contenant 10 mL d'eau déminéralisée. 6 : Sérum de cheval Lyophilisé. Un flacon contenant 6.0 mL de sérum de cheval lyophilisé. Le sérum de cheval reconstitute peut être conserve à −20°C jusqu’à la date de péremption. 7 : Sérum de contrôle 1 Prêt à l'emploi. Un flacon contenant 2.5 mL de sérum de contrôle 1. 8 : Sérum de contrôle 2 Prêt à l'emploi. Un flacon contenant 2.5 mL de sérum de contrôle 2. 9 : Sérum de contrôle 3 Prêt à l'emploi. Un flacon contenant 2.5 mL de sérum de contrôle 3. 10 : Substrat chromogène (TMB) Prêt à l'emploi. Un flacon contenant 60 mL de substrat chromogène (TMB). 11 : Solution d'arrêt Prête à l'emploi. Un flacon contenant 60 mL de solution d'arrêt. Autres composants du coffret • Notice d'utilisation • 10 films adhésifs pour couvrir les plaques Réservé à l’usage vétérinaire. Usage in vitro exclusivement. Equipement nécessaire mais non fourni Sauf indication contraire, tous les produits sont disponibles sur thermofisher.com. Use Description Général Equipement de laboratoire aux normes de sécurité nationales. Incubation Incubateur de microplaque (chauffant au moins à 50°C). Analyse des Lecteur de microplaques. Le lecteur doit être équipé d'un filtre résultats permettant de lire les plaques à 450 nm. Optionnel Laveur de microplaques. Mode opératoire Précautions • Les Normes de Sécurité nationales doivent être appliquées de façon stricte. • PrioCHECK™ Porcine PRV gB Ab Serum Strip Kit ne doit être réalisé que dans les laboratoires équipés pour cela. • Les échantillons doivent être considérés comme potentiellement infectieux. Tout matériel en contact avec ces échantillons doit être considéré comme potentiellement contaminé. Remarques Pour obtenir des résultats optimums avec PrioCHECK™ Porcine PRV gB Ab Serum Strip Kit, les précautions suivantes doivent être prises : • Le mode opératoire doit être rigoureusement suivi. • Tous les réactifs du coffret doivent être ramenés à T° ambiante (22±3°C) avant utilisation. • L'embout des pipettes doit être changé chaque fois qu'un nouvel échantillon ou réactif est prélevé. • Des réservoirs séparés doivent être utilisés pour chaque réactif. • Les composants du coffret ne doivent pas être utilisés après la date de péremption ou si un changement dans leur aspect est observé. • Les réactifs provenant de coffrets portant des numéros de lots différents, ne doivent pas être associés dans une même série de tests. • Le test doit être réalisé avec de l'eau déminéralisée ou une eau équivalente. Solutions à préparer à l'avance Sérum de cheval Reconstituer le sérum de cheval (Composant 6) lyophilisé avec 6 mL de l'eau déminéralisée (Composant 5). Le sérum de cheval reconstitué peut être conservé à −20°C jusqu’à la date de péremption. Les réactifs lyophilisés doivent être reconstitués de la manière suivante : 1. Ramener le flacon à 22±3°C. 2. Tenir le flacon verticalement et le tapoter contre le plan de travail pour s'assurer que tout le contenu du flacon se trouve au fond du flacon. 3. Ouvrir le flacon. 4. Ajouter la quantité d'eau déminéralisée spécifiée. 5. Reboucher le flacon et l'agiter doucement de manière à ce que le lyophilisat soit entièrement dissout. 6. Laisser reposer le réactif reconstitué 15 minutes à 22±3°C. 7. Agiter de temps en temps le flacon par retournement (en évitant la formation de mousse). Tampon ELISA Mélanger 1 volume de sérum de cheval reconstitué avec 9 volumes de tampon de dilution (Composant 3) (concentration finale de sérum de cheval dans le tampon : 10%). Pour chaque série de tests, utiliser du tampon ELISA fraîchement préparé. Il faudra donc veiller à préparer uniquement la quantité de tampon ELISA nécessaire à chaque série de tests (préparer 11 mL par plaque). Dilution du conjugué Préparer la dilution de travail du conjugué (30x) (Composant 2) en diluant le conjugué dans 1:30 le tampon ELISA. Pour une plaque : préparer un volume de 11 mL. Remarque : La dilution de travail du conjugué doit être préparée juste avant utilisation. Solution de lavage La solution de lavage (200x) (Composant 4) doit être diluée dans 1:200 de l'eau déminéralisée. La quantité fournie permet de préparer un volume final de 12 litres. Stabilité de la solution de lavage diluée : 1 semaine à 22±3°C. Remarque : Les lavages peuvent être effectués avec un laveur automatique ELISA. Si l'on ne dispose pas de laveur automatique, le lavage des plaques peut être fait manuellement avec 200 à 300 µL de solution de lavage par puits. Vider ensuite les plaques et répéter le lavage autant de fois que spécifié. Il n'est pas nécessaire d'égoutter les plaques sur du papier absorbant entre les lavages. Les tapoter fermement sur du papier absorbant après le dernier cycle de lavage. Incubation des sérums 1. Déposer 100 µL de sérum de contrôle 1 (Composant 7) dans les puits A1 et B1 de la plaque test (Composant 1). 2. Déposer 100 µL de sérum de contrôle 2 (Composant 8) dans les puits C1 et D1. 3. Déposer 100 µL de sérum de contrôle 3 (Composant 9) dans les puits E1 et F1. 4. Déposer 100 µL de chaque échantillon dans les autres puits. 5. Couvrir la plaque avec un film adhésif et l'agiter doucement. 6. Incuber 60±5 minutes à 37±1°C (ou à 22±3°C). Incubation avec le conjugue 1. Vider la plaque après la période d'incubation et la laver 6 fois avec 200 à 300 µL la solution de lavage. La tapoter fermement sur du papier absorbant après le dernier cycle de lavage. 2. Distribuer 100 µL de solution de travail du conjugué dans tous les puits. 3. Couvrir la plaque avec un film adhésif et l'agiter doucement. 4. Incuber 60±5 minutes à 37±1°C (ou à 22±3°C). Incubation avec le substrat chromogène (TMB) 1. Vider la plaque après la période d'incubation et la laver 6 fois avec 200 à 300 µL la solution de lavage. La tapoter fermement sur du papier absorbant après le dernier cycle de lavage. 2. Distribuer 100 µL de substrat chromogène (TMB) (Composant 10) dans tous les puits. 3. Incuber 20 minutes à 22±3°C. 4. Ajouter 100 µL de solution d'arrêt (Composant 11). 5. Homogénéiser le contenu des puits. Remarque : Commencer à ajouter la solution d'arrêt 20 minutes après avoir déposé la solution de substrat chromogène (TMB) dans le premier puits. Distribuer la solution d'arrêt dans tous les puits en gardant le même ordre et le même rythme que pour distribuer le substrat chromogène (TMB). thermofisher.com/support | thermofisher.com/askaquestion thermofisher.com 20 novembre 2019 Lecture du test et calcul des résultats 1. Mesurer la densité optique (DO) des puits à 450 nm dans les 15 minutes suivant l'addition de la solution d'arrêt. 2. Calculer la DO450 moyenne des puits E1 et F1 (= DO450 max). 3. Le pourcentage d'inhibition (PI) des sérums de contrôle et des échantillons est calculé selon la formule ci-dessous. Remarque : La DO450 des échantillons est exprimée en pourcentage d'inhibition (PI) par rapport à la DO450 max [= DO450 moyenne des puits E1 et F1]. PI = 100 − (DO 450 de l’échantillon / DO450 max) × 100 Interprétation des résultats Validation des critères 1. La DO450 max doit être au moins égale à 1.000. 2. Le pourcentage d'inhibition du sérum de contrôle 1 doit être >50%. 3. Le pourcentage d'inhibition du sérum de contrôle 2 doit être <50%. Si ces critères ne sont pas validés, les résultats de la série de tests sont ininterprétables. Remarque : Si la DO450 max moyenne est inférieure à 1.000, la solution de substrat chromogène (TMB) était peut-être trop froide au moment de son utilisation. Dans ce cas, penser à ramener la solution de substrat à 22±3°C avant utilisation ou incuber plus longtemps la plaque (sans dépasser 30 minutes d'incubation). Interprétation du pourcentage d'inhibition PI = ≥50% Positif PI = <50% Négatif Présence d'anticorps spécifiques de la glycoprotéine B (gB) du virus de la maladie d'Aujeszky dans l'échantillon. Absence d'anticorps spécifiques de la glycoprotéine B (gB) du virus de la maladie d'Aujeszky dans l'échantillon. Références bibliographiques 1. Van Oirschot JT, Houwers DJ, Rhiza HJ, Moonen PJ (1988). J Virol Methods 22(2–3):191–206. 2. Ben-Porat T, DeMarchi JM, Lomniczi B, Kaplan AS (1986). Virology 154(2):325–334. 3. Peeters B, de Wind N, Hooisma M, Wagenaar F, Gielkens A, Moormann RJ (1992). Virol 66(2):894–905. Service clientèle et assistance technique Support technique : rendez-vous sur thermofisher.com/askaquestion Visiter thermofisher.com/support pour avoir accès aux dernières nouveautés relatives aux services et à l'assistance technique, notamment : • Numéros de téléphone partout dans le monde • Commande et Support web • Guides de l’utilisateur, manuels et protocoles • Certificats d’analyse • Fiches de Données de Sécurité (FDS, également appelées FS (Fiches Signalétiques)) Remarque : Pour les FDS relatives aux réactifs et aux produits chimiques d'autres fabricants, contacter chaque fabricant. Garantie produit limitée Life Technologies Corporation et ses filiales garantissent leurs produits selon les termes et conditions générales de ventes disponibles sur le site www.thermofisher.com/us/en/home/global/terms-and-conditions. Si vous avez des questions, vous pouvez prendre contact avec Life Technologies à l'adresse web suivante : thermofisher.com/support. Prionics Lelystad B.V. | Platinastraat 33 | 8211 AR Lelystad | The Netherlands Les informations contenues dans ce guide sont susceptibles d’être modifiées sans préavis. CLAUSE DE NON-RESPONSABILITÉ : DANS LA MESURE PERMISE PAR LA LOI, LIFE TECHNOLOGIES ET/OU SA OU SES FILIALE(S) NE SAURAIENT ÊTRE TENUES RESPONSABLES DE DOMMAGES SPÉCIAUX, ACCESSOIRES, INDIRECTS, PUNITIFS, MULTIPLES OU CONSÉCUTIFS LIÉS AU PRÉSENT DOCUMENT OU A SON USAGE OU EN RÉSULTANT. Historique des révisions : Pub. Nº MAN0013951 (français) Rév. Date Description • Nouveau document. Conversion effectuée du document existant (PrioCHECK PRV gB 7589100_v1.0_f.doc) sur le modèle du document en cours, avec mises à jour associées aux informations de licence limitée, à 20 novembre A.0 2019 la garantie, aux marques et aux logos. • Changement du nom du kit de PrioCHECK® PRV gB en PrioCHECK™ Porcine PRV gB Ab Serum Strip Kit. Informations importantes sur les licences : Ces produits peuvent être couverts par une ou plusieurs licences à usage limité. En utilisant ces produits, vous acceptez les conditions générales de toutes les licences à usage limité. ©2019 Thermo Fisher Scientific Inc. Tous droits réservés. Toutes les marques sont la propriété de Thermo Fisher Scientific et de ses filiales, sauf indication contraire.
Fonctionnalités clés
- Test ELISA
- Détection d'anticorps
- Virus de la maladie d'Aujeszky
- Sérum de porc
- Surveillance des troupeaux
- Diagnostic individuel ou de troupeau
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Réponses et questions fréquentes
Quel est le principe du test PrioCHECK™ Porcine PRV gB Ab Serum Strip Kit ?
Ce test est un ELISA bloquant qui détecte les anticorps dirigés contre le virus de la maladie d'Aujeszky (MA). La liaison entre un épitope situé sur la glycoprotéine B (gB) du virus de la MA et un anticorps monoclonal spécifique est bloquée par les anticorps spécifiques présents dans l'échantillon.
Comment préparer la solution de lavage ?
La solution de lavage (200x) doit être diluée dans 1:200 de l'eau déminéralisée. La quantité fournie permet de préparer un volume final de 12 litres.
Quels sont les critères de validation du test ?
La DO450 max doit être au moins égale à 1.000. Le pourcentage d'inhibition du sérum de contrôle 1 doit être >50%. Le pourcentage d'inhibition du sérum de contrôle 2 doit être <50%.